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        新品上線丨寶銳生物高效RNase R,助力circRNA生產與檢測

        2023-03-28 09:49:23


        作為信息傳遞中間體的信使RNA(mRNA)在過去的幾年間被廣泛運用。理論上,mRNA可以在患者細胞內按需生產任何蛋白質,從而實現對疾病的治療。然而,線性mRNA因其自身易降解的缺陷使得它的應用面臨諸多挑戰。


        越來越多的研究發現通過反向剪接形成一個共價閉合環狀結構的circRNA,保護了circRNA不受核酸外切酶的降解,相比于mRNA更加穩定。此外,circRNA具有mRNA不可替代的免疫原性低、表達持久等優勢,讓更多研究者的目光聚集于此。


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        酶連方法制備circRNA


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        內含子自剪切制備circRNA


        無論采用哪種制備工藝,線性RNA總是circRNA的前體,消除線性RNA的干擾,是獲得高純度circRNA的關鍵。circRNA耐受RNase R消化,優質的RNase R可以完全消化線性RNA而不傷害circRNA,達到富集circRNA的目的。


        寶銳生物開發出一款純度高、活性高、特異性強的RNase R產品,為新一代RNA疫苗藥物提供助力。




        寶銳生物高效RNase R(Ribonuclease R)是一種來源于大腸桿菌RNR超家族且依賴Mg2?的核糖核酸外切酶,從3'→5'方向將線性RNA完全水解成二核苷酸和三核苷酸。對環狀RNA及雙鏈RNA不敏感,可用于特殊結構RNA的生產,如環狀RNA(circRNA)、套索結構RNA(lariat RNA)、3'突出末端少于7個核苷酸的雙鏈RNA以及具有復雜結構的tRNA等。RNase R常用于基因表達和可變剪切研究,可消化線性RNA使circ RNA或lariat RNA得到富集。





        1

        去除circ RNA中的線性RNA,應用于circ RNA的鑒定、富集和純化

        2

        可變剪切研究

        3

        識別內含子套索結構RNA

        4

        基因表達研究





          01 蛋白純度(SDS-PAGE)≥99%


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          02 寶銳生物高效RNase R特異性消化線性RNA


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        寶銳生物高效RNase R投入含有線性RNA的反應體系中進行反應,結果顯示當RNase R酶切反應時間只有10min時,線性RNA條帶已消失,表明RNase R可快速高效消化線性RNA。


          03 寶銳生物高效RNase R競品分析


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        用等量的寶銳生物高效RNase R和J1/J2兩家國內外競品,對1μg成環前后的產物進行酶切測試。結果顯示,相比于競品,寶銳生物高效RNase R特異性更強,對線性的RNA更專一,而對circRNA幾乎無影響,而競品公司circRNA的量經過酶切后已經發生改變。其次,同樣的酶量,寶銳生物高效RNase R能夠充分酶切線性RNA,競品仍有殘留。


          04 寶銳生物高效RNase R多次凍融不影響酶切效率和特異性


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        寶銳生物高效RNase R反復凍融多達20次,對酶切效率和特異性沒有影響。



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