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        上新!寶銳生物推出高靈敏度RNA酶殘留檢測試劑盒

        2023-06-15 11:18:27

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        RNase概念

        核糖核酸酶(Ribonuclesae,RNase)是一類催化RNA降解為小片段的核酸酶。RNase 家族包括RNase A、RNase B、RNase C、RNase H、S-RNase、RNase P、RNase T等。其中,RNaseA是一種有廣泛應用的核酸內切酶,RNase A在嘧啶核苷酸殘基C和U的3'端處高效且專一地催化單鏈RNA鏈骨架上的磷酸二酯鍵的裂開,形成具有2',3'-環磷酸衍生物的寡聚核苷酸。


        RNase污染的危害

        核糖核酸酶和脫氧核糖核酸酶(DNase)類似,廣泛存在于實驗環境,從研發階段的實驗操作、實驗室環境,到生產階段的商品化試劑、生化制劑等,都極易發生RNase污染,因此,對核糖核酸酶活性的監測是一個常規質量控制(QC)步驟。

         

        RNase檢測方法

        目前,常見的RNase殘留檢測方法主要包括放射性同位素法、分光光度法和熒光淬滅方法、電化學法等等,分光光度法存在檢測靈敏度低、不適合微量核酸酶殘留的活性檢測的缺陷,電化學法則受限于儀器設備,相比之下,熒光探針法靈敏度高、檢測速度快且能實現核酸酶活性的定量檢測,因此被認為是核酸酶殘留活性檢測的最佳選擇之一。寶銳生物自主研發基于熒光探針法的RNase殘留檢測試劑盒,可用于檢測環境、耗材、原料中的RNase殘留量,為相關質量檢測提供重要的數據參考。

         

        RNase殘留檢測原理

        RNase底物是一種合成的RNA寡核苷酸探針,其一端具有FAM熒光基團(Fluorophore)又稱供體(Donor),另一端具有 TAMRA淬滅基團(Quencher)又稱受體(Acceptor)。這兩個基團的吸收光譜有一定的重疊,當這兩個熒光基團間的距離合適時,熒光能量由供體向受體轉移,導致供體熒光分子自身的熒光強度衰減。當該底物被RNase切割后,底物首尾兩端分離,兩個基團分開,FAM的熒光不再被TAMRA淬滅,即可檢測到FAM的熒光,熒光信號的增加速率與酶的數量和活性呈正相關。使用熒光酶標儀在ex/em =490/520nm(RNase)的波長下測量,可以確定樣品是否有RNase污染,這樣通過熒光檢測就可以非常靈敏地檢測核酸酶的酶活性。


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        圖1 寶銳RNase核酸酶殘留檢測試劑盒檢測原理圖


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        經驗證,該試劑靈敏度可達0.078pg。

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        2. 寶銳RNase殘留檢測試劑盒靈敏度檢測效果


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        經驗證RNase A在0-10pg范圍內有良好的線性關系,R2>0.99,可以通過設置標準曲線,計算出樣品中RNase A的活性。本試劑盒應用于RNase A酶的檢測結果參考圖4。

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        3. 60分鐘內本試劑盒檢測不同量的RNase A的熒光強度變化圖


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        4. 寶銳RNase 殘留檢測試劑盒對RNase A標準品的檢測效果


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